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天然小鼠补体C1q蛋白
更新时间：2021-05-20
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-糖苷内切酶可从糖蛋白上裂解完整的聚糖-
在清洁制剂中具有高度稳定的酶-不含甘油，NaCl或其他添加剂（如EDTA）。
-测试所有酶是否没有蛋白水解或意外的糖苷活性
糖苷内切酶是糖蛋白分析中使用*泛的一些酶。这些酶从糖蛋白中释放出完整的聚糖，而外切糖苷酶则释放出单个的单糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙酰葡糖胺，甘露糖等）。
尽管PNGase F实际上是酰胺酶，但由于它具有类似的裂解完整的N-连接聚糖的活性，因此通常被包括在酶组中。它在天冬酰胺氨基酸和N-连接聚糖的壳二糖核心的ß-N-乙酰氨基葡糖糖（GlcNAc）之间裂解。Endo F酶和Endo H在第一个和第二个GlcNAc之间裂解N-连接的聚糖，留下亲水残基，这有助于增加去糖基化蛋白质的溶解度，减少蛋白质聚集物沉淀的可能性。PNGase F裂解所有N-连接的聚糖，而Endo H和Endo F酶则去除特定类型的N-连接的聚糖。PNGase F不会去除通常在植物糖蛋白上发现的含有与α-（1,3）连接的核心岩藻糖的寡糖。
O-糖苷酶也包括在这种酶的分类中，其从丝氨酸或苏氨酸氨基酸中去除了核心1 O-连接的聚糖（Gal-β1,3-GalNAc）。通常，O-连接的聚糖含有在分支和线性连接中均与半乳糖连接的另外的单糖，需要使用外切糖苷酶，例如唾液酸酶和半乳糖苷酶来除去另外的糖。
PNGase F从糖蛋白上裂解N-连接（天冬酰胺连接）的寡糖。
酶在37°C时保持*活性至少96小时。
查看产品文档：
Specsheet CofA SDS
部件号–酶的量
E-PNG01 – 60 µLs¹
E-PNG01-20 – 20 µLs¹
E-PNG01-200 – 200 µls²（以前为E-PNG05）
¹包含缓冲液，变性剂，Triton-
X²仅包含酶
PNGase F从糖蛋白上裂解N-连接（天冬酰胺连接）的寡糖。
酶在37°C时保持*活性至少96小时。
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¹包含缓冲液，变性剂，Triton-
X²仅包含酶
PNGase F从糖蛋白上裂解N-连接（天冬酰胺连接）的寡糖。
酶在37°C时保持*活性至少96小时。
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E-PNG01-20 – 20 µLs¹
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¹包含缓冲液，变性剂，Triton-
X²仅包含酶
PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-糖苷酶
PNGase F从糖蛋白上裂解N-连接（天冬酰胺连接）的寡糖。该酶将天冬酰胺脱氨为天冬氨酸，使寡糖保持完整。PNGase F不会去除通常在植物糖蛋白上发现的含有Alpha-（1,3）连接的核心岩藻糖的寡糖；为此，请使用肽N-糖苷酶A。
变性增加了切割速率。大多数天然蛋白质仍可以*被N-去糖基化，但是孵育时间可能需要增加。该酶在反应条件（37°C）下将保持*活性至少96小时。
有许多替代酶可用于去除N-聚糖，尤其是Endo F家族的酶和EndoH。这些酶在寡糖核心的两个N-乙酰氨基葡萄糖残基之间裂解，生成截短的糖分子上具有一个N-乙酰氨基葡糖残基残留在天冬酰胺上。这样可以提高溶解度，将蛋白质保留在溶液中，然后用PNGase F进行糖基去糖基化处理后沉淀出来，这样就可以完整清除寡糖。远藤F1裂解高甘露糖和一些杂合型N聚糖。Endo F2将消除双天线和高甘露糖（降低40倍的速率）。内三醇和岩藻糖基化双触角N-聚糖的Endo F3释放。远藤H 去除杂质和高甘露糖聚糖。
来源 Elizabethkingia miricola（曾是Meningosepticum的Chryseobacterium meningosepticum）
EC 3.5.1.52 PDB 1PGS UniProt Q9XBM8
pH 7.5的20 mM Tris-HCl中的PNGase F含量
包括20 µL和60 µL的包装大小：
5倍反应缓冲液7.5 – 250 mM磷酸钠，pH 7.5
变性溶液– 2％SDS，1 M Beta-巯基乙醇
Triton X-100 – 15％溶液
比活度> 25 U / mg
活性5 U / ml
分子量35,000道尔顿
pH范围6-10，最佳7.5
方案
1.在Eppendorf管中加入200 µg糖蛋白。用去离子水将最终体积调整为35 µl。
2.加入10 µl 5x反应缓冲液7.5和2.5 µl变性溶液。在100°C加热5分钟。
3.酷。加入2.5 µl Triton X-100并混合。
4.向反应中添加2.0 µl酶。在37°C下孵育3小时。
特异性裂解所有天冬酰胺连接的复合，杂合或高甘露糖寡糖，除非岩藻糖基化了α（1-3）核心；否则将其切掉。天冬酰胺必须在两个末端均肽键结合，无Endo F
比活性定义为在37°C，pH 7.5下1分钟内催化从1微摩尔变性RNase B中释放N-连接寡糖所需的酶量。通过SDS-PAGE监测切割（切割的RNase B迁移更快）。
储存将酶储存在4°C。
当前位置：
