抗HBVcAg单克隆包被抗体吸附在微量滴定板上。样品或标准品中存在的HBV核心抗原与吸附在板上的抗体结合；添加FITC 缀合的小鼠抗 HBVcAg抗体并与第一抗体捕获的抗原结合。

在孵育和洗涤步骤之后，加入HRP 偶联的小鼠抗 FITC抗体并与FITC偶联的抗 HBVcAg 结合。在洗涤步骤中去除未结合的 HRP 偶联的小鼠抗 FITC抗体后，将与HRP反应的底物溶液添加到孔中。

与样品中存在的HBV核心抗原的量成比例地形成有色产物。通过添加酸终止反应并在 450 nm 处测量吸光度。从重组HBV核心抗原制备标准曲线，然后确定样品浓度。