疏水相互作用色谱法是一种成熟的方法，可根据蛋白质的表面电荷和疏水性纯化蛋白质。提供疏水表面的色谱基质用于分离。这种方法不需要将任何亲和标签融合到要纯化的蛋白质上。因此它适用于天然和重组蛋白的纯化。我们提供疏水相互作用基质，其表面具有苯基、辛基或丁基。对于一种新型蛋白质，强烈建议比较不同的基质，并且可以使用含有少量每种基质的 HIC 筛选集。我们的 PureCube 琼脂糖基于 BioWorks Workbeads，提供高的结合能力和可重复的结果，尤其是在 FPLC 色谱应用中。

HIC 分离基于蛋白质的疏水区域与表面上含有疏水基团（例如丁基、辛基或苯基）的色谱介质的相互作用。高离子强度增强了这种相互作用，使 HIC 成为硫酸铵沉淀后或在高盐缓冲液中从离子交换介质洗脱后的理想纯化步骤。

蛋白质可能在非常高的盐浓度下沉淀，因此建议在小规模实验中测试感兴趣的蛋白质是否以结合所需的盐浓度保持在溶液中。

结合的蛋白质可以用低盐缓冲液洗脱。强烈建议使用盐梯度（例如硫酸铵或氯化钠）进行洗脱，以确保蛋白质保持在稳定所需的*佳盐浓度。

与等电点测定相比，很难预测蛋白质的整体疏水性，因为只有蛋白质表面上的孤立斑块可能是疏水性的，但足以与 HIC 基质相互作用。因此，建议测试不同的树脂是否适合以使蛋白质保持在溶液中的浓度结合感兴趣的蛋白质，以适合蛋白质稳定性和活性的盐浓度将其洗脱，同时将其与污染蛋白质分离。PureCube HIC 入门套件是为轻松比较三种不同材料而开发的。

图 1：疏水相互作用基质中使用的官能团的化学结构。

图 2：在 PureCube Phenyl Agarose 和竞争产品上纯化两种测试蛋白。对于较大的测试蛋白质（BSA，66 kDa），两种 HIC 树脂均获得了约 25 mg/mL 的树脂产量。对于较小的测试蛋白（14 kDa），PureCube 基质的产量大约高出 4 倍（PureCube：45 mg/mL，竞争对手 G：11 mg/mL）。纯化分批进行，在 1.5 M 硫酸铵、100 mM NaH2PO4、pH 7.0 下结合和洗涤，并在 100 mM NaH2PO4、pH 7.0 下洗脱。E1、E2：洗脱级分 1 和 2。

此列表包括适用于所有 HIC 琼脂糖产品的功能。如果在特定功能中存在差异，则会提及。